在细胞培养的领域中，RAW 细胞的培养具有一定的挑战性，但掌握了正确的方法，就能让它们在实验室中健康生长，为科学研究提供有力的支持。

一、细胞培养前的准备

培养基的选择RAW 细胞通常对培养基的成分有特定要求。一般推荐使用含有高糖的 DMEM 培养基，并添加适量的胎牛血清（FBS），FBS 的浓度一般在 10% - 15% 为宜。血清能为细胞提供必要的营养物质和生长因子，促进细胞的增殖和存活。同时，要确保培养基中含有适量的抗生素，如青霉素和链霉素，以防止细菌污染。但要注意抗生素的使用浓度，过高可能会对细胞产生毒性。

培养器材的处理细胞培养瓶、培养皿等器材需进行严格的清洗和灭菌处理。可先用洗涤剂清洗，再用蒸馏水冲洗干净，然后放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。灭菌条件一般为 121℃，15 - 20 分钟。对于移液管、移液器头等一次性耗材，要确保其质量合格，且在无菌环境中使用。

二、细胞培养环境的控制

温度RAW 细胞适宜生长的温度为 37℃，培养箱的温度应保持稳定。在培养过程中，要定期检查培养箱的温度显示是否准确，可使用温度计进行校准。温度波动过大可能会影响细胞的生长状态和代谢功能，甚至导致细胞死亡。

湿度培养箱内的湿度通常应保持在 95% 左右。合适的湿度可以防止培养基蒸发过快，维持细胞生长的微环境。可在培养箱内放置装有蒸馏水的托盘，以增加湿度。同时，要定期更换托盘内的水，防止细菌滋生。

气体环境RAW 细胞生长需要一定的气体环境，一般为 5% 的 CO₂。CO₂可以调节培养基的 pH 值，使其保持在适宜细胞生长的范围内。培养箱内应配备 CO₂气体供应系统，并定期检查气体浓度是否稳定。

三、细胞接种与传代

细胞接种密度合适的接种密度对于细胞的生长和增殖至关重要。初次接种 RAW 细胞时，密度一般为每平方厘米 5×10⁴ - 1×10⁵个细胞。接种密度过高可能会导致细胞营养不足和代谢废物积累，而过低则会影响细胞的生长速度和实验效率。

传代时机当 RAW 细胞生长至汇合度达到 80% - 90% 时，就需要进行传代。传代过早，细胞数量不足，影响实验结果；传代过晚，细胞可能会出现老化现象。在传代前，要先将培养基吸弃，用 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞表面，然后加入适量的胰蛋白酶进行消化。消化时间要根据细胞的状态和胰蛋白酶的活性进行调整，一般为 1 - 3 分钟。

传代操作注意事项消化后的细胞要轻轻吹打，使其成为单细胞悬液。在传代过程中，要注意操作轻柔，避免剧烈振荡，以免损伤细胞。传代后的细胞要接种到新的培养瓶或培养皿中，按照合适的接种密度进行培养，并及时更换新鲜的培养基。

四、细胞培养的日常观察与维护

观察细胞形态每天要在显微镜下观察 RAW 细胞的形态变化。正常的 RAW 细胞形态为圆形或椭圆形，边界清晰，细胞质均匀。如果发现细胞形态异常，如细胞变圆、皱缩、出现空泡等，可能是细胞受到污染或生长状态不佳，需要及时采取措施。

监测培养基颜色和 pH 值随着细胞的生长和代谢，培养基的颜色会发生变化，pH 值也会有所波动。一般来说，新鲜的培养基为红色，当 pH 值下降时，培养基颜色会变黄。可定期使用 pH 计检测培养基的 pH 值，若 pH 值偏离适宜范围，可通过添加适量的碳酸氢钠溶液或盐酸溶液进行调节。同时，要根据培养基的颜色变化及时更换新鲜培养基。

防止污染细胞污染是细胞培养中的大敌。在操作过程中，要严格遵守无菌操作原则，避免细菌、真菌和支原体等污染。定期对培养箱、超净工作台等设备进行清洁和消毒，可使用紫外线照射和 75% 的酒精擦拭等方法。同时，要注意实验环境的清洁，减少灰尘和微生物的滋生。

总之，养好 RAW 细胞需要从多个方面进行细致的把控，包括培养基的选择与配制、培养环境的优化、细胞接种与传代的操作规范以及日常的观察与维护等。只有每个环节都做到位，才能让 RAW 细胞在实验室中茁壮成长，为科学研究提供可靠的细胞模型和实验数据